□丁丽艳（黑龙江省农业科学院畜牧兽医分院）

奶牛的精子和卵子受精后，将受精卵移入培养液中，继续进行体外培养，通过体外培养阶段，可以检测出卵子的受精状况和受精卵的发育潜力，并应用不同发育阶段的胚胎进行后续的科研及生产。

在奶牛卵子体外培养中，胚胎培养液的应用至关重要。胚胎培养液中的成分较多，除无机和有机盐外，还添加维生素、氨基酸、核苷酸和嘌呤等营养成分及血清，最常用的有TCM199、BO和F10液。用它们培养奶牛胚胎时，可以采用体细胞共培养体系，即体细胞与胚胎在微滴中共同培养，利用体细胞生长过程中分泌的有益因子，促进胚胎发育，以达到克服发育阻滞的问题。

奶牛受精卵的培养广泛采用微滴法，胚胎数量与培养液量的比例为1枚胚胎用3—10μl培养液，一般5—10枚胚胎放在一个小滴中培养，以利用胚胎在生长过程中分泌的活性因子相互促进发育。

常用的胚胎培养条件与卵母细胞成熟培养条件相同，气相条件：体外培养一般采用含5%CO2的空气，或5%CO2、5%O2、90%N2的混合气体。培养系统内CO2不仅可以平衡培养基，而且还有助于细胞代谢中的丙酮酸转换成草酰乙酸，有利于细胞成熟；温度条件：不同的温度对胚胎体外成熟度的影响很大，过高或过低的温度均不利于胚胎体外成熟，奶牛受精卵一般采用38.5℃进行体外培养；湿度：对于湿度的调节，一般需在CO2培养箱内放置调湿盘，以维持100%的相对湿度，防止因培养液蒸发改变培养基成分的浓度影响PH值和渗透压。有的实验室采用88%N2、7%O2、5%CO2混合气体培养，以降低培养液中氧自由基浓度，提高胚胎发育率，效果也较好。

奶牛胚胎在培养过程中要求每48—72小时更换一次培养液,同时观察胚胎的发育状况，并及时进行记录。当胚胎发育到一定阶段时可进行相应的应用，一般2-细胞期胚胎用于核移植研究，致密桑堪胚或囊胚期胚胎用于奶牛胚胎移植或冷冻保存。

（本文由黑龙江省奶业协会供稿）